使用前彻底阅读说明书。本酶联免疫试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理，能测量人il-6，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
【工作原理】
il-6，白介素-6。il-6是一种多功能细胞因子，在体内免疫反应调节、血细胞的增生、防御机制和急性期反应中起中心作用。il-6由淋巴细胞产生，也能由非淋巴细胞合成，如单核/巨噬细胞，纤维母细胞，肝细胞，角化细胞，星形细胞，血管内皮细胞和各种肿瘤细胞。il-6的合成受多种细胞因子、核分裂因子和抗原的刺激而增加。il-6是一种糖蛋白，分子量25kd左右。所提供的elisa kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（elisa）。预先包被的人白介素6抗体为多克隆人白介素6抗体。检测相人白介素6抗体也为多克隆人白介素6抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记人白介素6抗体先后加入酶标板孔反应后，pbs或tbs洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过pbs或tbs的彻底洗涤后用底物tmb显色。tmb在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
【每套试剂盒中内容】(96t)
材料 数量
人白介素6标准品 96t(2vial)
预包被人白介素6抗体的96孔板 96t（8×12）
生物素标记人白介素6抗体 96t (1:100)
abc（亲和素-过氧化物酶复合物） 96t (1:100)
样品稀释液 96t×2
人白介素6抗体稀释液 96t×1
abc稀释液 96t×1
tmb显色液a 96t×1
tmb显色液b 96t×1
tmb终止液 96t×1
elisa专用洗涤液 96t×1(1:25)
【需要而未提供的试剂和器材】
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 自动洗板机。
4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5． 蒸馏水，容量瓶等
6． 干净的试管和eppendof管。
【注意事项】
1． 从-20℃取出的试剂盒，最好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。
2． 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3． 配制各种试剂时，切记混匀！
4． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
5． 建议所有人白介素6标准品、样本都做双份检测。
6． 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
7． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的pbs或tbs洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
【样品稀释的一般原则】
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于elisa试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
【试剂的准备和保存】
a. 人白介素6标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，彻底溶解混匀后做倍比稀释。
稀释后的人白介素6标准品在2小时内使用。
b．生物素标记人白介素6抗体工作液：在使用前2小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul生物素标记人白介素6抗体加人白介素6抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
c．亲和素-过氧化物酶复合物（abc）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（abc）加abc稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
d. tmb显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按tmb显色液a 9份加 tmb显色液b 1份的比例配制tmb显色工作液。
【操作程序】
1． 确定本次检测所需的已包被人白介素6抗体的酶标板孔数目。
2． 将倍比稀释的人白介素6标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5． 将准备好的生物素人白介素6抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01m tbs或0.01m pbs洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的abc工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01m tbs或0.01m pbs洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入tmb显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见人白介素6标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入tmb终止液0.1ml/孔。（显色反应最长不要超过30分钟）。
10． 用酶标仪在450nm测定o.d.值。
11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了n倍，其实际浓度应该×n。
【操作程序总结】：
准备试剂，样品和人白介素6标准品
加入准备好的样品和人白介素6标准品，37℃反应90分钟
洗板2次，加入生物素化人白介素6抗体工作液，37℃反应60分钟
洗板3次，加入abc工作液，37℃反应30分钟
洗板5次，加入tmb显色液，37℃反应
加入tmb终止液
30分钟之内读od值
计算标本待测因子含量
【检测范围】：300pg/ml→4.7pg/ml。
【敏感性】： ＜0.3pg/ml
【特异性】： 系统和其它细胞因子无交叉反应。
【保存】： -20℃ [短期内（如两周）可4℃]
【有效期】： 12个月（-20℃）。
【用途】： 用于体外定量分析液体标本（通用型）。
【references】
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